操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及*湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（完全培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

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中文名称：Bafilomycin A1 (自噬抑制剂，质子泵抑制剂)

英文名称：Bafilomycin A1

产品规格：100 μg

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

5989-81-1a-乳糖;纯品型;标准品;有证书 规格： 0.25g

15121-94-5樱草素 规格： HPLC≥98%;20mg

464-74-4蟾精 规格： HPLC≥98%;20mg

126223-28-7人参皂苷 Rg4 规格： HPLC≥98%;20mg

55395-07-8宝藿苷II；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A 规格： HPLC≥98%;5mg

156294-36-9Larotaxel 规格： HPLC≥98%;20mg

42294-03-1甘草酸单钾盐 规格： HPLC≥98%;20mg

83-79-4鱼藤 规格： HPLC≥98%;20mg

35833-62-63-乙酸南美楝属二醇酯 规格： HPLC≥98%;10mg

7374-79-0无梗五加苷B 规格： HPLC≥98%;20mg

a四氢姜黄素 规格： HPLC≥98%;20mg

174284-20-9芹菜素-7-0-（2G-鼠李糖）龙胆糖苷 规格： HPLC≥98%;20mg

Bafilomycin A1 (自噬抑制剂，质子泵抑制剂)小鼠巨噬细胞来源趋化因子(MDC)ELISA试剂盒 英文名： MDC ELISA Kit 5,5'-双(4,4,5,5-四基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,2'-联吩(>98.0%(T)) 5,5'-Bis(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-2,2'-bithiophene

小鼠髓样分化因子88(MyD88)ELISA试剂盒 英文名： MyD88 ELISA Kit S-F-L-L-R S-F-L-L-R

SIPA1L2  信号诱导增相关蛋白1样蛋白2抗体 规格: 0.2ml L-墨蝶呤 L-Sepiapterin

CK2  细胞角蛋白2抗体 规格: 0.1ml 次*(标准品) Hypaconitine

phospho-ATF2 (Thr53)  化活化复制因子2抗体 规格: 0.1ml 香叶（标准品） Geraniol

Rabbit Anti-Guinea pig IgG/FITC  FITC标记的兔抗豚鼠IgG 规格: 0.3ml 氟喹 Flumequine

CYP21  胆固21-羟化酶抗体 规格: 0.2ml 枸橼米芬,克罗米芬 Clomiphene citrate

人β-1,3-半乳糖转移酶1(β3GALT1)ELISA试剂盒 0.312-20 ng/mL TAE684 NVP-TAE684