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影响抗原-抗体特异性结合的因素包括:
1、酸碱度:抗原抗体特异性结合的*适酸碱度pH 6.0-8.0;
2、电解质:电解质可以影响溶液pH,也可影响蛋白质的等电点;(因此,WB的洗膜缓冲液,均用PBS/PBST或TBS/TBST等平衡盐液体,抗体稀释液和封闭液也多是上述液体配置,是为了保证抗原抗体反应的*条件)。
3、温度:一般为15-40℃,*适为37℃;(常用的一抗孵育时间为:室温,2-3h;二抗孵育时间:室温,1h。此外,4℃*封闭也应用广泛,这与抗原抗体反应的反应特点有关,涉及抗原抗体的结合率)。
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